Justin Long a percé au cinéma dans le rôle du commandant Brandon Wheeger dans le film de Dean Parisot, Galaxy Quest, avec Tim Allen et Sigourney Weaver. Il remporte ensuite la consécration avec la nomination du Saturn Award pour le meilleur jeune acteur grâce à son interprétation de Darius "Darry" Jenner, l’adolescent pourchassé par un monstre dans le film d’horreur Jeepers Creepers, le chant du diable (Jeepers Creepers) de Victor Salva.

Repéré comme l’un des jeunes acteurs les plus prometteurs de sa génération, cette réputation valorisante lui vaut d’être sollicité par le cinéma indépendant et les blockbusters. On le retrouve dans Die Hard 4 : Retour en enfer de Len Wiseman, avec Bruce Willis, Crossroads de Tamra Davis, La Coccinelle revient d’Angela Robinson, Dreamland de Jason Matzner, La Rupture de Peyton Reed, Admis à tout prix de Steve Pink et Idiocracy de Mike Judge.

Il a séduit de nombreux nouveaux fans dans la comédie à succès Même pas mal ! (Dodgeball) de Rawson Marshall Thurber. Justin Long interprète Justin aux côtés de la crème des comiques du cinéma américain populaire, Vince Vaughn et Ben Stiller, également producteur du film.